Objectif :
Base (Jours 1&2) :
Comprendre le principe de la chromatographie en général et de la chromatographie liquide en particulier. Réaliser quelques analyses en jouant sur les paramètres clés (débit, phase mobile …) et observer leurs conséquences.
Perfectionnement (Jours 2&3) :
Cette formation a pour objectifs de présenter les problèmes possibles lors de l'utilisation de l'HPLC.
Les participants pourront :
• Identifier les problèmes,
• Trouver et comprendre les causes,
• Résoudre ces anomalies par une mise en oeuvre d'actions préventives
Equipement didactique :
Chromatographe HPLC
Contenu :
Jour 1 (Base)
1) Historique de la chromatographie
2) Ce qu’est l'HPLC
3) Comment analyser un résultat en terme de sélectivité, résolution, capacité, …
4) Détermination pratique d’une courbe de Van Deemter
5) Qualité de l’injection
6) Simulation théorique d’un chromatogramme
Jour 2 (Base et perfectionnement)
1) les différents composants d’une chaîne de chromatographie HPLC
a) L'éluant
b) Les pompes, leur principe et leur entretien, la régulation du débit.
c) Le générateur de gradient d'élution (basse pression et haute pression)
d) Les systèmes d'injection
e) Les colonnes, technologie des colonnes et types de phases utilisées
f) Les détecteurs : indice de réfraction, UV fixe ou à barrettes de diodes
g) Acquisition du signal, lecture du chromatogramme et obtention des résultats de l'analyse
2) Analyse qualitative
3) L'analyse quantitative
a) Méthode manuelle de mesure de l'aire d'un pic, méthode utilisée par un software d'intégration pour mesurer l'aire d'un pic – les paramètres à ajuster
b) Détermination du cœfficient de proportionnalité
c) Méthode absolue et ses restrictions
d) Normalisation interne, normalisation interne corrigée
e) La méthode des ajouts dosés
f) La méthode de standardisation interne
Jour 3 (Perfectionnement)
Les méthodes d'analyse quantitative et qualitative : influence des anomalies de fonctionnement des différents éléments d'une chaîne chromatographique sur l'analyse quantitative et qualitative.
Validation pratique d'un appareillage pour la résolution d'un problème donné : influence des différents éléments de la chaîne chromatographique sur la qualité d'une séparation.
Développement de conditions opératoires visant à améliorer le niveau de sensibilité des méthodes.
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