Objectif :
Maîtriser les techniques HPLC – MS et MALDI-TOF grâce à un apprentissage théorique et pratique.
Contenu :
Contenu théorique :
I. La chromatographie liquide à haute performance (HPLC) : rappels
a) Introduction
Historique des méthodes chromatographiques.
Définitions et principe de la chromatographie.
Classifications des différentes techniques chromatographiques.
b) Origine et principe de la chromatographie liquide à haute performance.
c) Explication des différentes composantes d'un système de chromatographie liquide à haute performance :
- Les phases mobiles couramment utilisées et leur rôle.
- Les systèmes d'injection et les pompes.
- Les différentes colonnes et phases stationnaires utilisées en HPLC.
- La détection en HPLC (les détecteurs UV, la fluorimétrie, la conductivité, les détecteurs RI et ELSD).
- L'acquisition du signal.
d) L'optimisation d'une séparation en chromatographie : la théorie chromatographique
II. La spectrométrie de masse
a) Historique.
b) Définitions et principe général de la spectrométrie de masse.
c) Analyse des constituants d'un spectromètre de masse – classification des spectromètres de masse.
d) Introduction de l'échantillon (introduction directe, les méthodes de couplage : HPLC, GC).
e) Les grandes méthodes d'ionisation en spectrométrie de masse (EI, CI, SIMS, FAB) et celles spécifiquement utilisées en HPLC-MS (APCI, APPI, électrospray).
f) La séparation des ions.
g) La détection des ions : les différents analyseurs (magnétiques, à filtres quadripolaires, à piégeage d'ions).
III. La technique Matrix Assisted Laser Desorption Ionization Time Of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS)
a) Historique.
b) Domaine d'application du MALDI-TOF.
c) La préparation de l'échantillon (choix et rôle de la matrice).
d) Les composantes d'un spectromètre MALDI-TOF :
- Le principe AP-MALDI.
- L'analyseur à temps de vol (TOF).
e) Exemples d'utilisation du MALDI-TOF.
IV. L'analyse des spectres de masse
a) Détermination de la formule moléculaire
b) La fragmentation et les réarrangements.
c) Exemples de spectres de masses de composés chimiques et biologiques.
Aspects pratiques.
Exercices d'interprétation de spectres de masse.
Démonstrations sur HPLC-MS, utilisation de celui-ci et des logiciels de traitement des données.
Problèmes pratiques (choix des colonnes, optimisation du gradient, analyse de mélanges, identification de molécules biologiques).
Démonstration sur l'appareil MALDI-TOF, utilisation de celui-ci et des logiciels de traitement des données.
Exercices sur l'identification de molécules biologiques.
Pré-requis :
Notions de base sur les techniques chromatographiques, notions d'HPLC, notions de chimie organique.